17羥孕酮Elisa試劑盒試驗(yàn)操作過(guò)程
17羥孕酮Elisa試劑盒檢查以靈敏度較高、特異性較好等特點(diǎn)在食品安全檢查中得到廣泛的運(yùn)用，但在操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢查作用影響較大。如不留意，有也許致使顯色不*、花板、檢查無(wú)效等成果。所以試驗(yàn)進(jìn)程中應(yīng)留意選擇質(zhì)量的檢查試劑，嚴(yán)厲依照試劑闡明書進(jìn)行操作。在ELISA操作進(jìn)程中，一起做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，仔細(xì)做好各項(xiàng)查驗(yàn)記載，才干確保ELISA檢查質(zhì)量。
一、樣品的保留
用于ELSIA檢查的樣本十分廣泛，包含各種動(dòng)物安排、動(dòng)物體液以及其他食品獲取物等。有些樣本能夠直接經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)略離心、稀釋，有些則需求經(jīng)過(guò)理化辦法進(jìn)行獲取。檢查樣品應(yīng)確保新鮮，經(jīng)前處理的獲取液應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢查，時(shí)刻越長(zhǎng)，獲取液中的抗原的效價(jià)越低。如不及時(shí)檢查，應(yīng)及時(shí)放4℃冰箱保留。防止細(xì)菌污染，因菌體中也許富含內(nèi)源性HRP，也許會(huì)致使假陽(yáng)性反響。如在冰箱中保留過(guò)久，其間的HRP也許發(fā)生聚合，在間接法ELSIA檢查中可使本底加深。所以標(biāo)本如需保留做屢次檢查，宜選用少數(shù)分裝冰箱保留。安排樣本若不及時(shí)做處理，應(yīng)當(dāng)放置-15℃冰箱保留。
二、試劑的預(yù)備
嚴(yán)厲依照試劑盒的闡明書的請(qǐng)求預(yù)備好需求用到的試劑。LEISA檢查中應(yīng)選用蒸餾水或許去離子水，洗刷用水應(yīng)新鮮和高質(zhì)量，留意檢查是不是需求和洗刷液進(jìn)行稀釋。自配的緩沖液運(yùn)用PH計(jì)測(cè)量校對(duì)。從冰箱取出的試劑有必要與室溫平衡方可運(yùn)用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需求的試劑有些及時(shí)放回冰箱保留。
三、加樣
在ELSIA加樣進(jìn)程中，應(yīng)加所加物加到ELISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行濺起，不行發(fā)生氣泡。加標(biāo)本通常運(yùn)用微量加樣器，按規(guī)則的量參加孔板中。每次加標(biāo)本有必要更換槍頭，防止穿插污染。加酶符號(hào)物和底物液時(shí)可用定量多道加樣器，使加樣進(jìn)程敏捷完成。
四、溫育
溫育的方法通常選用水浴，可將酶標(biāo)板置于水浴箱中，酶標(biāo)板底貼著水面，是溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，酶標(biāo)板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封或許保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若保溫箱，酶標(biāo)板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱功能杰出的資料或許如金屬等，在盒底墊濕的紗布，將酶標(biāo)板放在紗布上。這樣能確保安穩(wěn)敏捷平衡。不管水浴還是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度能敏捷平衡。室溫溫育的反響，17羥孕酮Elisa試劑盒操作時(shí)的室溫要嚴(yán)厲約束在室溫的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20℃-25℃，詳細(xì)的操作時(shí)刻依據(jù)闡明書的請(qǐng)求嚴(yán)厲控制溫育。
五、洗刷
洗刷在ELISA進(jìn)程中雖然不是一個(gè)反響進(jìn)程，可是卻決議著試驗(yàn)的勝敗，ELSIA反響即是靠洗刷來(lái)到達(dá)將游離和的酶符號(hào)物別離的意圖。經(jīng)過(guò)洗刷來(lái)清洗掉殘留在酶標(biāo)板是未能與固相抗原或抗體的物質(zhì)，已經(jīng)在反響進(jìn)程中十分特異性地吸附于固相載體上的攪擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料資料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附石普遍性的，而在洗刷時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的攪擾物質(zhì)洗刷下來(lái)。能夠說(shuō)在ELSIA操作進(jìn)程中，洗刷是首要的關(guān)鍵技術(shù)，每一次清洗都有必要謹(jǐn)慎進(jìn)行，操作者應(yīng)嚴(yán)厲依照請(qǐng)求進(jìn)行洗刷。清洗的方法有手藝清洗和洗板機(jī)主動(dòng)清洗兩種。下面首要介紹手藝清洗方法。
1、吸干或許甩干孔內(nèi)反響液
2、用洗刷液洗一遍。（將洗刷液注滿板孔后，即甩去）
3、浸泡，將洗刷液注滿酶標(biāo)孔，放置1-2min，間歇搖擺，浸泡時(shí)刻不行隨意縮短。
4、甩掉孔內(nèi)液體，用清洗毛巾或許吸水紙拍干。
5、重復(fù)3和4進(jìn)程，洗刷4次。
六、顯色和比色
顯色是ELSIA中的zui后一個(gè)溫育進(jìn)程，此刻酶催化無(wú)色底物出產(chǎn)有色商品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的zui主要的要素。參加底物后的反響時(shí)刻和溫度應(yīng)當(dāng)按規(guī)則嚴(yán)厲控制。
七、酶標(biāo)儀讀板
測(cè)讀吸光度值時(shí)，要選用商品的靈敏吸收峰。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)讀數(shù)，即每孔先后讀兩次，在波長(zhǎng)，第二次在不靈敏的波長(zhǎng)，兩次測(cè)讀不移動(dòng)酶標(biāo)板的方位。終究讀數(shù)得到值為兩者之差，即靈敏波長(zhǎng)值減去不靈敏波長(zhǎng)值。雙波長(zhǎng)讀數(shù)能夠減少由容器壁劃痕或指紋形成的光攪擾。
八、成果判定
17羥孕酮Elisa試劑盒依據(jù)試驗(yàn)讀數(shù)，成果商品闡明進(jìn)行成果判定。
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